HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統在乳與乳制品行業(yè)中的應用-環(huán)凱微生物官網(wǎng)

HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統在乳與乳制品行業(yè)中的應用

發(fā)布時(shí)間：2014-12-09 瀏覽次數：5448 分享：

隨著(zhù)人們生活水平的提高，我國乳制品行業(yè)也在快速發(fā)展，因此乳制品的食品安全日益成為公眾關(guān)注的焦點(diǎn)。單核細胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)簡(jiǎn)稱(chēng)單增李斯特菌，是牛奶和乳制品中威脅人類(lèi)健康的主要病原菌之一，也國際上公認的李斯特菌十個(gè)菌株中唯一能引起嚴重食物中毒的菌株。該菌在冰箱冷藏室內這種較低溫度的環(huán)境下長(cháng)時(shí)間生長(cháng)繁殖，對廣大的奶制品消費群體產(chǎn)生潛在的健康威脅，因此，必須對其檢測加以重視。

廣東環(huán)凱微生物科技有限公司長(cháng)期從事微生物控制和檢測的相關(guān)研究，是我國最早研究、開(kāi)發(fā)食品微生物安全檢測產(chǎn)品的廠(chǎng)家之一，對微生物檢測試劑有著(zhù)成熟的研發(fā)及生產(chǎn)經(jīng)驗。我公司針對目前乳制品行業(yè)及質(zhì)量監測單位對單增李斯特菌快速檢測的需求及情況，特別從英國公司Microgen Bioproducts引進(jìn)了HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統，使得單增李斯特菌檢驗方式較之前有很大的改進(jìn)，使得技術(shù)操作人員能更準確、快捷的檢測出目標菌。

HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統（也稱(chēng)為Microgen Listeria-ID鑒定系統），相對于傳統的生理生化檢驗，具有三大特點(diǎn)。

1）操作方便：無(wú)需配制溶液或試劑，占用體積小。

2）反應時(shí)間短：接種后的鑒定條培養18-24小時(shí)后通過(guò)肉眼可見(jiàn)的顏色變化記錄結果（無(wú)需額外添加任何試劑）

3）判定簡(jiǎn)單快速：無(wú)需對照相關(guān)書(shū)籍或標準進(jìn)行菌株鑒別判定，通過(guò)購買(mǎi)產(chǎn)品后贈送的Microgen鑒定系統軟件分析即可得到鑒定結果。

其創(chuàng )新性在于將可疑菌株產(chǎn)生的生化反應與菌種生化反應數據庫中的大量菌株的生化反應結果進(jìn)行對比，依靠統計學(xué)原理，對少數由細小表達突變或實(shí)驗操作因素導致的不確定結果進(jìn)行合理判斷，最終從數據庫中調出可能性最大的菌株數據與其進(jìn)行匹配，避免了傳統方法中由菌株因個(gè)別實(shí)驗結果差異導致的結果無(wú)法判定。

目前的分子學(xué)方法，雖然在操作上十分快速，但判定依據不明確，生物和技術(shù)上的變化性直接限制了分子分型方法的可重復性，而這反過(guò)來(lái)限制了它的分辨力；同時(shí)目前成本較高，無(wú)法進(jìn)行推廣普及。

每條Microgen Listeria-ID鑒定條包括11份干燥反應底物和1個(gè)空管，反應底物主要用來(lái)檢驗培養物對碳水化合物的利用，空管則用于溶血試驗.

HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統使用方案

以GB 4789.30-2010 食品安全國家標準食品微生物學(xué)檢驗單核細胞增生李斯特氏菌檢驗流程為例（或其他標準的檢驗流程）,將可疑菌落篩選出后，用TSA-YE平板劃線(xiàn)純化。如下圖中的初篩步驟。

國標中涉及到的培養基及試劑可參考

在對可疑菌株進(jìn)行純化后。圖2紅色方框中的鑒定步驟可用下列鑒定方法進(jìn)行替代，以達到簡(jiǎn)化實(shí)驗，減少工作量的目的。

首先，必須確認可疑菌株為李斯特氏菌屬。

1：李斯特氏菌屬鑒定（如實(shí)驗安排合理，可當天觀(guān)察到結果）

1.1：革蘭氏染色實(shí)驗。

1.2：氧化酶實(shí)驗。

1.3：觸酶（過(guò)氧化氫酶）實(shí)驗

1.4：動(dòng)力實(shí)驗（25 ℃和37 ℃）。在圖1中初篩步驟劃線(xiàn)TSA-YE的同時(shí)接種半固體瓊脂做動(dòng)力實(shí)驗，通過(guò)此步，可在后一天協(xié)同其他實(shí)驗共同確定是否是李斯特軍屬。

如仍然不能確定，可使用李斯特氏菌乳膠凝集試劑進(jìn)行確定。

上述四個(gè)步驟的實(shí)驗用品不包含在HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統的鑒定條中需另外購置

貨號	產(chǎn)品名稱(chēng)	規格	類(lèi)別
029010	革蘭氏染色液	10 ml×4瓶	盒
029170	氧化酶試紙	10片/盒	盒
029161	過(guò)氧化氫酶試劑	2 mL/支×10	盒
026050	半固體瓊脂	250g	瓶（干粉）
075350A	半固體瓊脂	10 ml×20支	盒（管裝）
075350	半固體瓊脂	20支	盒（西林瓶）
HM 48	李斯特氏菌乳膠凝集試劑盒	50 tests	盒

此五個(gè)實(shí)驗結果：革蘭氏陽(yáng)性短桿菌，氧化酶陰性，觸酶陽(yáng)性，在25℃培養具有動(dòng)力，但在37℃培養則無(wú)動(dòng)力，可確認其為李斯特氏菌屬。之后，使用HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統對對可疑菌進(jìn)行進(jìn)一步鑒定。

2：HK-MID李斯特氏菌生化鑒定系統使用方法

2.1：試劑條使用說(shuō)明

1）菌懸液制備好后，用無(wú)菌滴管加4滴（約100微升）菌懸肉湯至每個(gè)反應小管；

2）向管12中加入1滴溶血素試劑；

3）用粘性封口膜或鑒定條蓋封口，放至35-37℃的培養箱中培養18-24小時(shí)。

2.2：結果觀(guān)察

培養結束后，對應反應結果對照表（說(shuō)明書(shū)背面）讀取結果，填寫(xiě)在結果記錄報告單上。

注：溶血素實(shí)驗結果：檢查小管的底部，若覆蓋著(zhù)一層清晰的血紅細胞，而底部血紅細胞層上方呈現透明的溶液結果為陰性；若底部無(wú)清晰的血紅細胞層，上方出現黃褐色的均勻溶液，則結果為陽(yáng)性。

2.3：軟件使用

在鑒定結果記錄表中，所有反應都被分配在三元組中（三個(gè)反應為一組），每個(gè)反應下面均標有對應的數值1、2、4，將每組中陽(yáng)性反應對應的數值加起來(lái)將得到一個(gè)四位數，作為信息代碼（Octal Code），將這個(gè)信息代碼輸入Microgen鑒定軟件系統中，系統將顯示出數據庫中5個(gè)最接近結果的菌種，從而得到鑒定結果。

詳細的MID鑒定系統使用方法，參見(jiàn)

總結：使用該鑒定方案，可以從原來(lái)的至少2 天（最長(cháng)4天）的鑒定時(shí)間，縮短到1天（總體李斯特氏菌篩選檢驗的時(shí)間由6~10天縮短到5~7天），為企業(yè)的生產(chǎn)爭取了寶貴的時(shí)間。

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