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李斯特氏菌屬生化鑒定解決方案

發(fā)布時(shí)間：2014-12-09 瀏覽次數：7099 分享：

李斯特氏菌屬(Listeria)為一種短小的革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽孢桿菌，DNA堿基組成G+C含量為36-38mol%，廣泛存在于環(huán)境當中，僅部分種對人及動(dòng)物致病，導致腦膜炎、菌血癥和孕婦早產(chǎn)等。在李斯特氏菌屬中，單增李斯特氏菌(L. Monocytogenes)是一種重要的病原菌，宿主主要是人和動(dòng)物。人感染李斯特氏菌99%是食用了單增李斯特菌污染的食品，尤其是即食類(lèi)的食品。在美國每年大約有2500人患李斯特氏菌病，病死率高達20%-30%。因此，李斯特氏菌的分離和鑒定仍然是當今研究的熱點(diǎn)。

從食品或者臨床樣本分離的李斯特氏菌的鑒定方法主要有API(Analytic Products INC)鑒定系統、羅氏公司的Micro-ID、Biolog和HK-MID-Listeria鑒定系統等。

廣東環(huán)凱微生物科技有限公司利用101株野生分離株對新型HK-MID-Lister鑒定系統、傳統方法、API-Listeria方法進(jìn)行了評估，鑒定結果見(jiàn)表1。

表1 三種方法鑒定結果的符合率

Table1 The coincidence rate of the three methods

李斯特菌屬菌屬 Listeria sp.	HK-MID(株)	API (株)	傳統方法 (株)	符合率(%)
HK-MID和傳統方法	API和傳統方法	HK-MID和API
單增生李斯特氏菌 L. monocytogenes	69	67	69	100	97.1	97.1
英諾克李斯特氏菌 L. innocua	25	24	25	100	96.0	96.0
西爾李斯特氏菌 L. seeligeri	2	0	2	100	0.0	0.0
威爾斯李斯特氏菌 L. welshimeri	3	2	3	100	66.7	66.7
格式李斯特氏菌 L. grayi	2	1	2	100	50.0	50.0
合計	101	94	101	100	93.1	93.1

從表1中可以得出，與傳統方法對李斯特氏菌屬的鑒定結果相比較， HK-MID-Listeria和API-Listeria分別達到了100%和93.1%。API-Listeria鑒定比傳統方法的鑒定率稍微偏低，具體是API- Listeria對2株單增李斯特氏菌、1株英諾克李斯特氏菌、2株西爾李斯特氏菌、1株威爾李斯特氏菌和1株格式李斯特氏菌不能給出鑒定結果；而傳統方法和HK-MID-Listeria對李斯特氏菌的鑒定完全相符。HK-MID-Listeria和API-Listeria鑒定方法之間差異主要是與兩種鑒定方法的原理不同引起的。

1、在溶血反應方面

HK-MID- Listeria鑒定系統在鑒定條上，第12孔為空白孔，添加血紅素到加有100微升菌懸液的第12 個(gè)空的孔中培養，通過(guò)是否產(chǎn)生沉淀分層即可判斷陰陽(yáng)性，管底有沉淀結果為陰性即不溶血，反之為陽(yáng)性即溶血（見(jiàn)圖1），因此HK-MID- Listeria的鑒定實(shí)驗不需要做溶血的補充實(shí)驗。

API-Listeria “DIM”的反應結果通過(guò)顏色變化來(lái)判讀，陽(yáng)性反應為橙色, 陰性反應為淡粉色或淺橙色, 由于各種因素的影響，如：添加試劑不穩定等因素，常常會(huì )造成反應結為中間色，結果判讀比較困難，容易導致誤判。API-Listeria鑒定系統的“DIM”的反應并不能完全替代溶血反應，需要補充溶血性試驗。

2、HK-MID- Listeria使用操作更方便，結果更快、更可靠

API- Listeria 加樣過(guò)程中要特別注意不能產(chǎn)生氣泡；而HK-MID- Listeria對菌懸液的濃度沒(méi)有嚴格的要求，加樣更直接（見(jiàn)圖1）。HK-MID- Listeria鑒定條上面覆蓋有封口薄膜，可以防止在培養過(guò)程中液體過(guò)度蒸發(fā)；API- Listeria需要額外維持濕度的濕室。

API- Listeria鑒定的可疑菌落要求在非選擇性平板上生長(cháng)的純培養物；而HK-MID- Listeria可以從選擇性平板或者顯色培養基平板上挑取單菌落進(jìn)行鑒定，可以提前24h得到鑒定結果。

HK-MID- Listeria鑒定條已通過(guò)了國際AOAC 的認證。其鑒定系統中含有的12種生化反應中，有3種特征性反應：七葉苷、阿拉伯糖和海藻糖，這3種生化反應中任意一種為陰性即可判定鑒定的菌株為非李斯特菌屬，這3種生化反應可以提高HK-MID- Listeria 鑒定結果的準確性。

3、在數據庫方面

API- Listeria鑒定系統對幾個(gè)菌株不能鑒定其模式菌與其數據庫有很大的關(guān)系。API- Listeria鑒定系統的數據庫主要是根據常見(jiàn)李斯特氏菌和臨床分離樣本建立的數據庫，致使從食品中分離的部分菌株的生化反應模式不包含在A(yíng)PI-Listeria的數據庫中。

HK-MID- Listeria鑒定系統模式菌數據庫是基于從食品、藥品和臨床診斷等分離的菌株的鑒定來(lái)建立的。因此，HK-MID- Listeria鑒定系統更適合應用從食品、藥品中分離的李斯特氏菌的鑒定。相對于A(yíng)PI- Listeria鑒定系統來(lái)說(shuō)，HK-MID- Listeria鑒定系統的數據庫中缺乏環(huán)境如土壤等中李斯特氏菌的數據。

總之，HK-MID- Listeria鑒定系統加樣方便，每孔滴加100微升左右；可以直接從選擇性培養基挑取菌落；不需要補充血平板實(shí)驗；通過(guò)AOAC認證，結果更可靠；整個(gè)鑒定過(guò)程節約48h。

參考文獻：田亮，盧勉飛，林干等，《新型HK-MID-Listeria 生化鑒定系統的鑒定效果評估》，食品研究與開(kāi)發(fā)，2014,35（329）：86-88。

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