產(chǎn)品名稱(chēng)：NLS-Cas9(H840A) Nickase
中文名稱(chēng)：NLS-Cas9(H840A) 內切酶
產(chǎn)品編號與包裝規格：
| 編號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKE377 | NLS-Cas9(H840A) Nickase | 50μg/盒 | crispr基因編輯（內切酶） | 1575 |
產(chǎn)品描述：
CRISPR/Cas9 是細菌和古細菌在長(cháng)期演化過(guò)程中形成的一種適應性免疫防御系統，改造后的 II 型 CRISPR/Cas9 系統在基因的定點(diǎn)修飾中展現出巨大的應用潛能。脫靶效應是目前 CRISPR/Cas9 技術(shù)應用的一個(gè)難題，在基因編輯應用中，可能會(huì )出現難以預測的后果。
本制品是 spCas9 Nuclease 的一個(gè)突變體。Cas9 Nuclease 具有兩個(gè)切割活性中心，從而實(shí)現在 sgRNA 靶序列特定位點(diǎn)引入 DNA 雙鏈斷裂（DSB）。NLS-Cas9（H840A）Nickase 在Cas9Nuclease 基礎上突變其中一個(gè)切割活性中心，其能在 sgRNA 靶序列所在的DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，并且通過(guò)在蛋白兩端加了核定位信號（NLS），可使蛋白進(jìn)入細胞核內進(jìn)行基因組 編輯，配合一對 gRNA 使用，可實(shí)現 Cas9 Nuclease 相同的基因編輯效果，由于有效的識別序列由 20 bp 增加至 40 bp，可明顯減少意外的脫靶基因修飾，從而顯著(zhù)提高CRISPR/Cas9 技術(shù)基因修飾的特異性。
產(chǎn)品特點(diǎn)：純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時(shí)引入質(zhì)?；虿《靖蓴_； 可顯著(zhù)降低脫靶效應。
產(chǎn)品用途：
1，基于蛋白與 sgRNA 轉染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；
2，基于蛋白與 sgRNA 轉染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；
3，sgRNA 剪切靶點(diǎn) DNA 效率檢測，降低體內篩選成本；
4，體外剪切靶 DNA 的特異位點(diǎn)。
應用實(shí)例：圖例）Cas9(H840A) Nickase DNA 切割活性檢測：
帶有靶位點(diǎn)的超螺旋 DNA（cccDNA）；
酶切產(chǎn)生切刻后的開(kāi)環(huán) DNA（ocDNA）；
50-100ng 酶可有效切割 cccDNA（>95%）。
保存體系：10mM Tris-HCl，300mM NaCl，0.1mM EDTA，50% Glycerol， PH7.4，25℃。
保存溫度：-20℃保存，或-80℃長(cháng)期保存。
Cas9(H840A) Nickase 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| NLS-Cas9(H840A) Nickase(0.1μg/μl) | 500 μL |
| 10×Reaction Buffer | 1 ml |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測僅可見(jiàn)清晰單一的目的條帶，純度達 95%；內毒素含量< 0.1EU/μg；qPCR 方法檢測無(wú)大腸桿菌基因組殘留；無(wú) RNase、核酸內、外切酶污染。
體外切割體系（20μL）：
| Supercoiled DNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| NLS-Cas9 H840A Nickase | 50-100 ng |
| 10×Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min
注：在反應體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止RNase 污染。
相關(guān)產(chǎn)品：
| HKE365 | NLS-Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9（D10A）Nickase |
| HKE368** | Cas9（D10A, H840A）Nuclease |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 為 Cas9(D10A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列互補的 DNA 鏈上產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可以減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(D10A, H840A) Nuclease，具有靶 DNA 結合活性，但無(wú)切割活性，可用于陰性對照等用途。
