產(chǎn)品名稱(chēng)：EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測試劑盒
英文名稱(chēng)：Multiplex PCR Detection Kit for PEC-STEC-EHEC
注：EPEC 表示腸道致病性大腸埃希氏菌（Enteropathogenic Escherichia coli）；STEC 表示產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌（Shiga toxin-producing Escherichia coli）；EHEC 表示腸道出血性大腸埃希氏菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli）。
產(chǎn)品編號與包裝規格：
| 編號 | 規格 |
| KJD02P | 24 測試/盒 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒基于 PCR 技術(shù)，并適用于食品中 EPEC、STEC 和 EHEC 的檢測。
EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測試劑盒檢測原理：利用 5對特異性引物和 PCR反應所需其他試劑，如反應緩沖液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等，加入待檢核酸樣品，即可進(jìn)行 PCR 擴增反應。經(jīng)比對擴增產(chǎn)物目標條帶組合即可判定所對應的致瀉大腸埃希氏菌類(lèi)別。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. 快速簡(jiǎn)便：將酶、引物等反應組分混勻后進(jìn)行干粉化處理，增加試劑穩定性，使用時(shí)減少溶液配制步驟，更為便捷，整個(gè)檢測反應可在 3 h 內完成；
2. 特異性高：由 GB 4789.6?2016《食品微生物學(xué)檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗》提供的目標基因引物，保證擴增反應的高度特異性；
3. 判讀簡(jiǎn)單：擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀(guān)察目標條帶即可判別，直觀(guān)方便。
儲存條件與保質(zhì)期：2~8℃條件下儲存，有效期為12個(gè)月。
所需其他材料和適用儀器：
1. PCR 儀器、高速離心機、電泳儀、水平電泳槽、紫外儀、移液器、移液槍頭及離心管等；
2. 瓊脂糖、溴化乙錠（EB）或其他核酸染料。
EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測試劑盒產(chǎn)品組分：
| 編號 | 組分名稱(chēng) | 規格 × 數量 |
| -- | 干粉試劑 EP | 8管 × 3排 |
| -- | 干粉試劑 ST | 8管 × 3排 |
| -- | PCR 復溶液 | 1mL × 1管 |
| Y02 | 陽(yáng)性對照 | 1管（凍干型） |
| -- | 陰性對照 | 1管（凍干型） |
| -- | 裂解液 | 1mL × 1管 |
| -- | 超純水 | 1mL × 1管 |
| -- | 6 × Loading buffer | 240μL × 1管 |
| 說(shuō)明書(shū) | 1份 |
EPEC-STEC-EHEC多重PCR檢測試劑盒使用指南：
1，樣品前處理
1) 參照 GB 4789.6?2016，使用 1 μL 接種環(huán)刮取營(yíng)養瓊脂平板或斜面上培養18 h~24h 的菌落，懸浮到含 30 μL 裂解液的無(wú)菌離心管中，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min；
2) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的 DNA，可轉移至 0.2 mL 無(wú)菌離心管中，在-20℃下可長(cháng)期保存。
2，加樣、反應
1) 首次使用時(shí)，分別加入 80 μL 超純水至陽(yáng)性對照和陰性對照管中，充分溶解，-20℃存儲待用；
2) 取出凍干粉試劑 EP 和 ST，按照需求分別剪取 n 個(gè)檢測試劑管（n=待檢測樣品數+1 管陽(yáng)性對照+1 管陰性對照），每管加入 18 μL 復溶液，充分溶解后待用；
3) 向上述已加入復溶液的 n 個(gè)反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽(yáng)性對照各 2 μL，緊蓋后置于 PCR 儀中按設定的反應程序進(jìn)行擴增反應；
4) PCR 反應程序如下：
3，結果判讀：反應后每管中加入 4μL 6×Loading buffer，混勻，并取 8 μL 樣品經(jīng) 1.5%瓊脂糖凝膠電泳后在紫外儀下觀(guān)察，陰性對照僅有 uidA 條帶擴增，陽(yáng)性對照中出現目標條帶（參照圖 1），PCR 試驗結果成立。根據每個(gè)樣品對應的凍干粉試劑EP 和 ST 反應產(chǎn)生的目標條帶種類(lèi)，并查找該目標條帶組合所對應的致瀉大腸埃希氏菌類(lèi)別（參照表 1），即為檢測結果。若陰陽(yáng)性對照管反應結果不符，則本次檢測結果無(wú)效，應重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
